为EYE开讲丨袁进教授为“爱（EYE）”发声：有机酸在脱细胞角膜基质制备中的效果分析-国际眼科时讯庞凤仪


编者按
角膜病是世界性的主要致盲性眼病之一，其中约有70%可以通过角膜移植手术复明，但目前我国供体角膜的数量远远不能满足这方面的治疗需求。因此异种角膜能否作为新的角膜供体移植来源？如何实现异种角膜的改造？其安全性和有效性如何？
《国际眼科时讯》有幸邀请到中山大学中山眼科中心袁进教授作为新栏目——“有声开讲”的特邀嘉宾，为“爱（EYE）”发声。作为首发的开场嘉宾闪金镇那一夜，袁教授针对我国角膜移植这一焦点、难点问题拉文霍德庄园，与我们分享了一篇由台湾大学医学院医学团队所发表的精彩文章，介绍了一种全新脱细胞技术，通过有机酸处理以获取角膜材料。
研究目的明确：“开源”
袁教授指出：目前我国约有300~500万角膜盲患者菲律宾火山，但由于传统习俗限制，每年获取的角膜捐献数不到5000例盲妃十六岁，供体与需求之间存在巨大差距，解决这一瓶颈的目标和方向非常明确，即开源节流。开源即增加角膜供体来源，节流即节约使用角膜戏答的意思。其中增加角膜供体来源的方式有两种：一是通过劝捐等方式增加角膜捐献量朵拉玩宾果，另外一种是通过技术发展（脱细胞等技术）获得异种角膜进行临床应用。
袁教授还介绍道，我国在此方面的研究已处于世界前列，目前已有两种脱细胞角膜产品得到CFDA的认证，角膜产品上市的应用效果反馈良好超星舰队。此外苏三说歌词，还有一些方法正处于研究阶段。总的来说头七怎么算，基础研究和技术发展是一个不断向前推进的过程。
主要技术：有机酸脱细胞技术
由于猪角膜与人角膜结构最为相似，因此目前异种角膜来源主要为猪谁在你背后。脱细胞技术是异种角膜处理的一项重要步骤，如何最大程度去除异种源性细胞成分且不损伤角膜胶原结构是异种角膜应用于临床的关键所在。目前关于异种角膜脱细胞技术主要包括几大流派：第一种为高渗盐水渗透压处理，第二种为反复冻融灵山侠侣，第三种为化学法脱细胞术包括消化酶、酒精等，而此篇文章中所介绍的为利用有机酸进行脱细胞处理。
研究设计：巧妙
此项研究设计巧妙，比较了有机酸、柠檬酸、冰醋酸的脱细胞效果刘铜锣原型，分析安全性、有效性。首先设计并比较了不同有机酸浓度组，包括20%、30%、40%，利用PPA处理后观察比较角膜的透明性、比较角膜最大拉伸强度以评估角膜应力结构的变化、电镜下观察角膜超微结构变化等。完成不同浓度有机酸安全性实验评估后，进行了脱细胞效率分析评估，检测角膜中剩余DNA含量以及胶原含量变化，同时还评估了脱细胞后角膜基质是否有利于细胞生长。
此外，除了体外研究，该研究研究了兔角膜基质细胞、角膜上皮细胞在脱细胞基质上生长情况，建立了新西兰兔角膜移植模型，对脱细胞角膜机制进行了为期60天观察，评价移植后角膜的转归情况。
研究结果：有效、安全
研究结果显示，有机酸在脱细胞过程中不会引起角膜透明性改变，不同有机酸的脱细胞效率有所差别。从剩余DNA含量方面比较发现，柠檬酸、冰醋酸存在浓度依赖性曲线变化，浓度越高则脱细胞越彻底，但同时浓度越高对角膜胶原损害程度亦越大。有机酸脱细胞效果则显著优于现存的脱细胞方法法力陷阱，且成纤维细胞、上皮细胞均显示出良好的对数生长曲线，证明采用有机酸脱细胞后的角膜基质是一种良好的细胞生长环境。
动物模型结果显示，术后1~2天脱细胞角膜机制会出现轻度水肿现象马洪刚，术后7天左右可恢复透明性，与临床上目前使用。
根据这些研究结果，该研究中建议使用20%或30%有机酸，达到比较好的脱细胞效率和安全性平衡，为异种角膜处理提供了一种全新的处理方案，为临床使用提供更好的角膜基质。
局限性
虽然文章中展示了可喜的脱细胞技术的思路和选择，但是还是存在一些局限性。譬如有机酸、柠檬酸、冰醋酸在处理异种角膜时依然存在一定程度的胶原蛋白损伤，如何进一步通过交联技术增加处理后角膜张力的强度，应该是值得进一步研究中深入探索的问题。
此外，该研究中动物实验研究仅观察了术后60天角膜情况，观察期偏短峡山水库。袁教授进一步分析道，事实上在人角膜移植观察期间发现在早期（尤其是3个月到半年内）脱细胞角膜基质会出现重塑现象，厚度有所变薄你最有才，而人角膜是不存在此类情况的，分析其原因可能为脱细胞造成基质胶原结构改变而出现重塑，具体原因和机制值得进一步探索。
展望
最后，袁教授总结道，生物角膜的应用为临床提供了一种全新的选择，在研究不同脱细胞技术的同时，还有更多领域值得研究人员去进一步挖掘，寻找一种从外观透明性、组织结构功能、力学特征、生物相容性以及移植后生物医学规律与人角膜更接近的更为理想的角膜供体替代物，将为角膜供体短缺问题提供真正意义上全新的解决方案，将来利用这种脱细胞的角膜基质接种上皮细胞或者内皮细胞，邓佩仪构建具有良好生物学活性的角膜，那将是一个全新的角膜时代的到来。
点评专家简介

袁进 教授
中山眼科中心
博士生导师 中华医学会青委会副主任委员 中华医学会角膜病学组委员 中国医药教育协会智能医学专委会副主任委员兼智能眼科学组组长 ADES创始会员 老医会眼科分会委员兼角膜眼表学委会副主任委员 海医会眼科分会眼表学组委员 广东省医师协会常委兼青委会副主任委员原文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30244654（来源：《国际眼科时讯》编辑部）
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